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上海帛科生物技術(shù)有限公司
   
     
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解脲脲原體探針法熒光定量PCR試劑盒
  • 品牌:帛科
  • 產(chǎn)地:進口、國產(chǎn)
  • 貨號:BKP7334
  • 價格: ¥3800/盒
  • 發(fā)布日期: 2020-06-24
  • 更新日期: 2024-12-23
產(chǎn)品詳請
產(chǎn)地 進口、國產(chǎn)
品牌 帛科
貨號 BKP7334
用途 公司產(chǎn)品僅用于科研
包裝規(guī)格 50T
純度 詳見說明書%
CAS編號
是否進口

概述:
熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴增過程中,隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增,PCR產(chǎn)物不斷積累,熒光信號也會相應(yīng)的增加,這樣就可以通過熒光強度的變化來對PCR反應(yīng)進行實時的監(jiān)測。產(chǎn)品僅供科研使用本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對DNARNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實現(xiàn)基因的相對定量、定量和定性分析。

產(chǎn)品名稱

英文名稱

貨號

解脲脲原體探針法熒光定量PCR試劑盒

Ureaplasma urealyticum

BKP7334

實時熒光定量PCR
實時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限,實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個樣品Ct值的計算,根據(jù)標準曲線獲得定量結(jié)果。因此,實時熒光定量PCR無需內(nèi)標是建立在兩個基礎(chǔ)之上的:
1
Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時,剛剛進入真正的指數(shù)擴增期(對數(shù)期),此時微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現(xiàn)性極好,即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增,得到的Ct值是恒定的。
2
Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系,可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定,因此,實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內(nèi)標法是一種準確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確,重現(xiàn)性*的定量方法,已得到全世界的公認,廣泛用于基因表達研究、轉(zhuǎn)基因研究,藥物考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。
探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖:

使用方法:
一、解脲脲原體探針法熒光定量PCR試劑盒稀釋PCR陽性對照(以10E2-10E7拷貝/μL610倍稀釋度為例)
1.
注意:由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
2.
標記6個離心管,分別為7,6,5,43,2
3.
用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4.
7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
5.
換槍頭,在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
6.
換槍頭,在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中,充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
7.
重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8.
如果有N個樣品,必須設(shè)置N+2個提取,多出的一個是PC(樣品制備陽性對照),一個是NC(樣品制備陰性對照)??梢杂?/span>10μL上步制備的PCR陽性對照的第4號(濃度為1×10E4 拷貝/μL10μL相當于1萬拷貝)或第5號(濃度為1×10E5 拷貝/μL,10μL相當于10萬拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品,則PCNC的體積也必須是200μL。
9.
用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設(shè)置qPCR反應(yīng)(20 μL體系,在樣品制備室進行)
10.
如果只做1次重復(fù),則標記N+9PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照,6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復(fù),則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加23倍。
11.
產(chǎn)品僅用于科研在標記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加)

熒光定量PCR服務(wù):
產(chǎn)品僅供科研使用簡介:實時熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出,該技術(shù)不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍,而且與常規(guī)PCR相比,它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點,目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化;比較不同組織的mRNA表達差異;驗證基因芯片,siRNA干擾的實驗結(jié)果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術(shù)服務(wù),全部實驗皆使用進口試劑完成,主要定量PCR儀器。
1
、熒光定量PCR服務(wù)要求:
01)請您提供新鮮的且盡量多的材料;或直接提供純化好的總RNA(大于 5 ug/樣品);或直接提供純化好的DNA(大于 5 ug/樣品)。
02)請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。
03)請?zhí)峁┍M可能詳細的背景資料:DNA/RNA 來源等
2
、熒光定量PCR操作程序
01)引物(探針)設(shè)計與合成。
02)提取DNA/RNA,樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。
03)進行Real Time PCR實驗,進行實驗結(jié)果分析。
04)實驗完成后,提供完整的實驗報告(含軟件分析結(jié)果)及引物等實驗材料。
3
、熒光定量PCR的收費標準:
 
我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進行不同的收費標準。
TNFSF11 Protein Human 重組人 RANKL / OPGL / TNFSF11 / CD254 蛋白 (Fc 標簽)SALICYLICACID水楊酸鈉*100G54-21-6RT

大鼠神經(jīng)質(zhì)細胞(RNsn)(1×106) BxPC-3, 人原位胰腺腺癌細胞株 Human錄化鉍 Bismuth trichloridq 7787-60-

人胚腎細胞;293 [HEK-293]AIBI偶氮二異基咪唑啉鹽酸鹽500毫克AR

IL1R2 Others Mouse 小鼠 IL1R2 / CD121b 人細胞裂解液 (陽性對照) TRIS-GLYCInepUFFER,10XSOLUTIONTris-甘酸緩沖液蛋白組學(xué)級1LCOLD

人腎動脈內(nèi)皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL(多效唑)
T24,
人細胞他扎羅?。藴势罚┵|(zhì)量規(guī)格:HPLC法含量測定Tazarotene

人細胞;PC-3 [PC3] 大鼠卵巢成纖維細胞完全培養(yǎng)基 100mL他扎羅汀質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRTazarotene

Hepa 1-6 小鼠細胞靈芝酸D(標準品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC98%,標準品Ganoderic acid D

CXADR Others Mouse 小鼠 CXADR 人細胞裂解液 (陽性對照) 鹽酸左西替利嗪(標準品)質(zhì)量規(guī)格:含量測定Levoceitrizine HCl

615小鼠株;Ca761鹽霉素,沙利霉素質(zhì)量規(guī)格:assay 12%~24%Salinomycin
人羊膜細胞;WISH二水合乙二酸,英文名或英文縮寫:Oxalic acid dihydrate,級別:CP,98.5%,規(guī)格:1公斤

2V6.11細胞,人胚腎細胞 小鼠細胞,P3X63Ag8.653細胞 CL-0405NCI-H716(人結(jié)直腸腺癌細胞)5×106cells/瓶×28-1 97% 8-NONqNOIC cCID 3164-67-8

CNE-2Z(人細胞) 5×106cells/瓶×2乙酸鎘二水合物,英文名或英文縮寫:Cadmium acetate dihydrate,級別:CP98%,規(guī)格:25

hMNC-CB-c single donorula-pure 臍帶血來源的人類單核細胞 人腎小管上皮細胞HRPTEpiC加拿大樹膠shēng huà shì jì容量:100

T739小鼠肺腺株;LA795SafraninO 5g/10g/50g/100g原裝 Sigma S2255
解脲脲原體探針法熒光定量PCR試劑盒人絨癌細胞;JEG-3 大鼠腸粘膜上皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL帕拉米韋三水合物Peramivir Trihydrate質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR

腦動脈平滑肌細胞Many types of cells包裝:5 × 105(1ml)神經(jīng)保護劑NXY059NXY-059,Cerovive質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR

CN2 Others Mouse 小鼠 Coactin 2 / CN2 人細胞裂解液 (陽性對照) APMSF(進分)p-APMSF, Hydrochloride質(zhì)量規(guī)格:進分,sigma A6664

大鼠主動脈內(nèi)皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL(1R,2S)-1-氨基-2-茚醇 (1R,2S)-(+)-cis-1-Amino-2-indanol質(zhì)量規(guī)格:0.98

PC-12(高分化)大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(高分化) PC-12 (high differeiation) rat pheochromocytoma cells (high differeiation) RPMI-1640(GIBCO)+10%FBSN-BOC-D-色氨醇N-Boc-D-tryptophanol 質(zhì)量規(guī)格:BR,>98%
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA
模板
2
.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物??梢允?/span>DNA也可以是RNA,一般20bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3
10×PCR Buffer
4
2mM dNTPmix:含dATP、dCTPdGTP、dTTP2mM
5
Taq
二、操作步驟
1
.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物110pM               2μl
引物210PM              2μl
Taq
酶(2U/μl            1μl
DNA
模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
ddH2O               50 μl
PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2
.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93 40s → 58 30s → 72 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72 保溫7min
3
.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4待電泳檢測或-20長期保存。
4
PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。zui好設(shè)立一個專用的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。


聯(lián)系方式
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