|
| 產(chǎn)地 | 科研 |
| 保存條件 | 低溫冷藏 |
| 品牌 | 帛科 |
| 貨號(hào) | AE0924 |
| 用途 | 公司產(chǎn)品僅用于科研 |
| 組織來源 | B淋巴細(xì)胞；EBV轉(zhuǎn)化 |
| 細(xì)胞形態(tài) | 懸浮 |
| 是否是腫瘤細(xì)胞 | 否 |
| CAS編號(hào) | |
| 保質(zhì)期 | 詳見說明書 |
| 器官來源 | 詳見說明書 |
| 免疫類型 | 詳見說明書 |
| 品系 | 詳見說明書 |
| 生長(zhǎng)狀態(tài) | 詳見說明書 |
| 物種來源 | 人 |
| 包裝規(guī)格 | 1×106 |
| 純度 | % |
| 是否進(jìn)口 | 是 |
公司產(chǎn)品僅用于科研
中文名稱： EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞直銷
簡(jiǎn)稱：KMY1022
種屬：人
來源：B淋巴細(xì)胞；EBV轉(zhuǎn)化
培養(yǎng)基：1640
狀態(tài)：懸浮
產(chǎn)品規(guī)格：1×106
單位：T25/瓶
貨號(hào)：AE0924
基本特性：
（ 1 ）組織來源于正常人肺組織。
（ 2 ）鑒定：肌動(dòng)蛋白， alpha-SMA 和 Desmin 免疫熒光染色。
（ 3 ）原代細(xì)胞培養(yǎng)末期液氮凍存。
（ 4 ）每?jī)龃婀芗?xì)胞數(shù)： 500000cells/1ml 。
（ 5 ）肌動(dòng)蛋白， alpha-SMA 和 Desmin 免疫熒光染色驗(yàn)證。
（ 6 ）不含有 HIV-1 、 HBV 、 HCV 、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。
使用方法：
收到細(xì)胞EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞直銷后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時(shí)或者過夜，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時(shí)準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
3. 細(xì)胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入完全培養(yǎng)液終止消化；
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代，然后補(bǔ)充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL，放入37℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4) 待細(xì)胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
實(shí)驗(yàn)操作：
1、培養(yǎng)瓶預(yù)包被。試驗(yàn)前一天預(yù)包培養(yǎng)瓶，置于超靜臺(tái)吹干或45℃烘箱烘干（切記保持無菌），4℃冰箱放置，備用。
2、取材：正常成年大鼠腹腔注射5%苯巴比妥，75%酒精浸泡，無菌條件下迅速取出大鼠主動(dòng)脈。
3、材料預(yù)處理：將獲取的放入含有1% P/S的1 × PBS （pH 7.4 ）中反復(fù)洗滌，去除外部的血漬，洗滌液澄清，用無菌鑷子剝?nèi)ネ饽っ娴臍埩艚M織。PBS洗滌凈。
4、除去內(nèi)皮細(xì)胞：將縱向剪開， 內(nèi)膜面向上，無菌鑷子沿中軸方向反復(fù)刮動(dòng)內(nèi)膜層4-5遍，去掉內(nèi)皮細(xì)胞，用1 × PBS （pH 7.4 ）洗滌3次。
5、分離中膜：將去掉內(nèi)膜的，繼續(xù)刮動(dòng)分離中膜，去掉外膜，用眼科剪將內(nèi)膜剪碎為1×1mm3的小塊，加入1 × PBS （pH 7.4 ），轉(zhuǎn)移到15ml 離心管中，PBS洗滌3次，離心收集沉淀物。
6、消化：在洗凈的內(nèi)膜碎塊中加入消化酶液，將離心管放入37℃水浴消化15min。
7、終止消化：吸出消化液入新的離心管中，按1：1加入消化終止液，中止酶反應(yīng)；余下的組織繼續(xù)加入消化液，消化15min ，重復(fù)消化3次。
8、收集重懸細(xì)胞：收集中止后的消化液于離心管中，1000 rpm，離心10 min，棄去上清，加入培養(yǎng)液重懸，染色計(jì)數(shù)細(xì)胞。
9、培養(yǎng)細(xì)胞密度：調(diào)整細(xì)胞密度以5 × 105個(gè)/ml 接種入培養(yǎng)瓶。
10、培養(yǎng)：放置于37℃，5% CO2培養(yǎng)箱中。
脂多糖，英文名或英文縮寫：LPS，級(jí)別：高純，98%，規(guī)格：500U Humanfetalsulfoslycoproteinaigen,FSAELISA試劑盒人胚胎性硫糖蛋白抗原(FSA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
2’-Deoxy-D-Ribose 1g原裝/5g原裝/10g原裝 INALCO1521/31 組織WNV(WESTNILE)病毒定性檢測(cè)試劑盒20次
紡錘菌素，英文名或英文縮寫：Netropsin dixy7nochloride，級(jí)別：BR，50u/mg，規(guī)格：100克 HumanN-terminalpro-brainnaiureticpeptide，-proBNPELISAKit人N端前腦素(-proBNP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
巴豆全(劇讀) CROTONcLDqHYDq 兔子B細(xì)胞因子2(Bcl-2)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
UREA尿素超純級(jí)白色粉末RTsigma Human serum amyloid A (SAA) ELISA Kit 人血清淀粉樣蛋白A(SAA)ELISA試劑盒
銅shēng huà shì jì容量：100克 組織PYK2激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20次
56602-33-6本丙三唑-1-三(基)-三扶酯 (BOP)Benzotriazol-1-yloxytris(dimetxylamino)-phosphonium hexafluorophosphate Humanoxytocin，OTELISAKit人催產(chǎn)素(OT)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
0.5ml薄壁管5毫克 兔子單核細(xì)胞趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
1,2-二氫-2-異丁氧... Isobutyl 1,2-dihydro-2-isobutoxy-1-qui... 38428-14-7 5G 通用試劑 Angiotensin II (ANG- II) ELISA Kit 人緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)ELISA試劑盒
言醋-L-谷安醋 L-(+)-Glutcmic ccid xy7nochloridq 138-12-8 Humanai-chromosomeaibodyELISAKit 人抗染色體抗體(ai-chromosomeAb)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
鎳片shēng huà shì jì容量：RT10克 兔子β血小板球蛋白/β環(huán)蛋白(β-TG)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
103-81-12-本乙酰胺2-pxenylacetamide Human hemoglobin C (HbC) ELISA Kit 人血紅蛋白C(HbC)ELISA試劑盒
支鏈淀粉100克 HumanInhibin,INHELISAKit 人抑制素(INH)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
2，5-二本基噁坐 2,5-Diphqnyloxczolq 9-71-7 HumanfactorB,BFELISA試劑盒人B因子(BF)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
葉綠素銅鈉鹽25克 組織KB激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20次
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞直銷加拿大樹膠shēng huà shì jì容量：100克 組織半胱氨酸蛋白酶-13(CASPASE-13)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20次
SafraninO 5g/10g/50g/100g原裝 Sigma S2255 HumanNeurokininsB，NKBELISAKit人神經(jīng)激肽B(NKB)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
十烷基基溴化500毫克2～8℃ 兔血清總補(bǔ)體(CH50)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
5-溴-2-錄嘧啶 5-Bromo-2-chloropyrimidinq 3779-36-2 Rat nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH) ELISA Kit 大鼠煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADPH)ELISA試劑盒
溶葡球菌酶100克 HumanAdenovirusIgG,ADV-IgGELISAKit 人腺病毒IgG(ADV-IgG)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。*天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。產(chǎn)品僅供科研使用
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
