產(chǎn)地 | 進(jìn)口、國產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號 | BKP4359 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號 | |
是否進(jìn)口 | 是 |
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
猴型逆轉(zhuǎn)錄病毒PCR檢測試劑盒供應(yīng) | Simian TypeD Retrovirus(SRV)DPCR | BKP4359 |
技術(shù)服務(wù)內(nèi)容:
實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內(nèi)參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對表達(dá)量。
特點(diǎn)優(yōu)勢:
1. 特異性:猴型逆轉(zhuǎn)錄病毒PCR檢測試劑盒供應(yīng)使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實(shí)現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達(dá)到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時,可實(shí)現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實(shí)用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌,可實(shí)現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
6-Aminouracil 873-83-6 中文名:6-氨基尿嘧啶 分子式:C4H5N3O2 ()測試盒 Glycosylated hemoglobin () test kit
4-Aminosalicylic acid 65-49-6 中文名:4-氨基水楊酸 分子式:C7H7NO3 肝/肌糖元測試盒 Liver / muscle glycogen test kit
3-Amino-1-phenyl-2-pyrazolin-5-one 4149/6/8 中文名:3-氨基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮 分子式:C9H9N3O β-葡萄糖酸苷酶測試盒 Beta - glucose - acid - enzyme test case
2-Amino-5-nitrothiazole 121-66-4 中文名:2-氨基-5-硝基噻唑 分子式:C3H3N3O2S 紅細(xì)胞NADH高鐵血紅蛋白還原酶測試盒 Erythrocyte NADH high iron hemoglobin reductase test kit
1-Amino-2-methylanthraquinone 82-28-0 中文名:1-氨基-2-甲基蒽醌 分子式:C15H11NO2 碳酸氫 500g
兔粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(rabbit GM-CSF) 作用: ELISA 規(guī)格: 48T/96T 進(jìn)口分裝 5-[Bis(2-hydroxyethyl)amino]-1-methyl-1H-benzimidazole-2-butanoic acid ethyl ester 3543-74-6 中文名: 分子式:C18H27N3O4 度:98.0% 關(guān)鍵詞:
兔粒細(xì)胞集落刺激因子elisa試劑盒 兔粒細(xì)胞集落刺激因子試劑盒 規(guī)格型號:96T/48T 兔粒細(xì)胞集落刺激因子試劑盒,規(guī)格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:兔粒細(xì)胞集落刺激因子試劑盒、兔粒細(xì)胞集落刺激因子elisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個月。 5-Amino-2-naphthalenesulfonic acid 中文名:5-氨基-2-萘磺酸 分子式:C10H9NO3S
兔粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)ELISAKit ELISA. 96T/48T 5,6-Dimethyl-2-Benzothiazolamine 29927-08-0 中文名:5,6-二甲基-2-苯并噻唑胺 分子式:C9H10N2S 度:98.0% 關(guān)鍵詞:
兔可溶性細(xì)胞間黏附分子1 英文名稱: Rabbit soluble Iercellular Adhesion Molecular 1 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫: sICAM-1 4-Benzoyl-3-methyl-1-phenyl-5-pyrazolone 4551-69-3 中文名:4-苯甲酰基-3-甲基-1-苯基-5-吡唑啉酮 分子式:C17H14N2O2
兔可溶性破骨細(xì)胞異化因子(rabbit RANKL) 作用: ELISA 規(guī)格: 48T/96T 進(jìn)口分裝 4-Androstenediol 1156-92-9 中文名:4-雄烯二醇 分子式:C19H30O2
猴型逆轉(zhuǎn)錄病毒PCR檢測試劑盒供應(yīng)NCI-H358(人非小細(xì)胞細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 PC-12(腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞)富馬酸酮替芬質(zhì)量規(guī)格:>99%,BRKetotifen fumarate
CL-0464USMC(大鼠平滑肌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2富馬酸酮替芬(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品Ketotifen fumarate
CD44 Others Human 人 CD44 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 倍他米質(zhì)量規(guī)格:>98% Betamethasone
人肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞RNAHIBEpiC miRNA5 μg倍他米(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98% ,標(biāo)準(zhǔn)品Betamethasone
5637(HTB-9)細(xì)胞,人細(xì)胞 大鼠細(xì)胞(癌細(xì)胞接種到肝臟成瘤),Walker-256細(xì)胞 MLF, 小鼠成纖維細(xì)胞比阿培南質(zhì)量規(guī)格:度>97%Biapenem
人真皮成纖維母細(xì)胞-HDF-a2'-(二芐氨基)-6'-(二乙氨基)熒烷(>98.0%(HPLC)(T))質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC)(T)2'-(Dibenzylamino)-6'-(diethylamino)fluoran
CGB5 Others Human 人 CGB5 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 3',6'-二甲氧基熒烷(>98.0%(HPLC))質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC)3',6'-Dimethoxyfluoran
家兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞;2012083MSC1,1'-亞甲基二-2-萘酚(>97.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格:>97.0%(GC)1,1'-Methylenedi-2-naphthol
二氫葉酸還原酶缺陷型中國倉鼠卵巢細(xì)胞;CHO/dhFr- 細(xì)胞,TE-11細(xì)胞 B82細(xì)胞,鼠細(xì)胞系2-萘基芐基(>98.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)Benzyl 2-Naphthyl Ether
B16-F10, 小鼠色素瘤高轉(zhuǎn)移細(xì)胞 Mouse5-溴吲哚 質(zhì)量規(guī)格:>99%5-Bromoindole
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)*個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn), 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。