產(chǎn)地 | 進(jìn)口、國產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號(hào) | BKP4462 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號(hào) | |
是否進(jìn)口 | 是 |
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號(hào) |
潰蝕齒密螺旋體PCR檢測試劑盒說明書 | Treponema phagedenisPCR | BKP4462 |
技術(shù)服務(wù)內(nèi)容:
實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內(nèi)參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對表達(dá)量。
特點(diǎn)優(yōu)勢:
1. 特異性:潰蝕齒密螺旋體PCR檢測試劑盒說明書使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實(shí)現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達(dá)到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí),可實(shí)現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實(shí)用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌,可實(shí)現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個(gè)檢測過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證,確保在使用過程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
Atractylodin 中文名:蒼術(shù)素 分子式:C13H10O 紅細(xì)胞NADH高鐵血紅蛋白還原酶測定試劑盒(比色法)
Atorvastatin calcium 中文名:阿托伐他汀鈣 分子式:C33H35FN2O5 銅-ATP酶(Cu-ATPase)測定試劑盒(比色法)
Aspirin 中文名:阿司匹林 分子式:C9H8O4 總谷胱甘肽(T-GSH)/氧化型谷胱甘肽(GSSG)測定試劑盒(微板法)
Aspergillon A 中文名: 分子式:C22H32O 酸性0酸酶(ACP)測定試劑盒(微板法)
Aspartame 中文名:阿司帕坦 分子式:C14H18N2O5 抗酸性0酸酶(SACP)試劑盒(比色法)
豚鼠C反應(yīng)蛋白(CRP)ELISA試劑盒 ,英文名: CRP ELISA Kit 2,4-Dihydroxypyridine 626-03-9 中文名: 分子式:C5H5NO2 度:98.0% 關(guān)鍵詞:
豚鼠Ⅱ型肺泡細(xì)胞表面抗原(KL-6)ELISA試劑盒 ,英文名: KL-6 ELISA Kit 2,4-Bis(α,α-dimethylbenzyl)phenol 中文名:2,4-雙(α,α-二甲基苯甲基)苯酚 分子式:C24H26O 度:98.0%
豚鼠25羥基維生素D3(25 HVD3)ELISA試劑盒 ,英文名: 25 HVD3 ELISA Kit 2',3'-Di-O-acetyl-5'-deoxy-5-fluorocytidine 161599-46-8 中文名: 分子式:C13H16FN3O6 度:98.0% 關(guān)鍵詞:
兔組織因子途徑抑制物elisa試劑盒 兔組織因子途徑抑制物試劑盒 規(guī)格型號(hào):96T/48T 兔組織因子途徑抑制物試劑盒,規(guī)格型號(hào):96T/48T,來源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:兔組織因子途徑抑制物試劑盒、兔組織因子途徑抑制物eisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個(gè)月。 Allopurinol 315-30-0 中文名:別嘌醇 分子式:C5H4N4O
兔組織因子途徑抑制物(TFPI)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 Allyl cinnamate 1866-31-5 中文名:肉桂酸烯丙酯 分子式:C12H12O2 度:98.0% 關(guān)鍵詞:
潰蝕齒密螺旋體PCR檢測試劑盒說明書IL17A Protein Canine 重組狗 IL17 / IL17A 蛋白奧氮平質(zhì)量規(guī)格:>99%,USP,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)Olanzapine
人神經(jīng)細(xì)胞(HN) (10×106 ) 小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(EGFP標(biāo)記) MGC80-3(MGC-803)人細(xì)胞奧氮平(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品Olanzapine
CM-R001大鼠肺微內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL美伐他汀,康百汀質(zhì)量規(guī)格:>97%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)Mevastatin
SELL Others Cynomolgus 食蟹猴 CD62L / L-Selectin / SELL 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 美伐他汀(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:>95%,標(biāo)準(zhǔn)品,用于含量測定Mevastatin
人微內(nèi)皮細(xì)胞HCMEC6-氨基青霉烷酸質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR6-Aminopenicillanic acid
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細(xì)胞;KMY0901 人真皮上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL富馬酸氯馬斯?。?biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC含量測定Clemastine fumarate
髓核細(xì)胞培養(yǎng)基NPCM富馬酸氯馬斯汀質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRClemastine fumarate
CST1 Others Human 人 CST1 / Cystatin-1 / Cystatin-SN 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 富馬酸酮替芬(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:含量測定Ketotifen fumarate
GPH4 豚鼠心肌來源細(xì)胞己內(nèi)酰胺(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:供檢查用2-Oxohexamethylenimine
CM-M014小鼠氣管和上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL百蕊草素I;山柰酚-3-葡萄糖鼠李糖苷;阿福豆苷(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品Kaempferol-3-O-glucorhamnoside
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn), 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。