產(chǎn)地 | 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號(hào) | BKP4253 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號(hào) | |
是否進(jìn)口 | 是 |
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4:PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號(hào) |
單胞菌通用PCR檢測(cè)試劑盒直銷 | Pseudomonas spp.PCR | BKP4253 |
技術(shù)服務(wù)內(nèi)容:
實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過(guò)與內(nèi)參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對(duì)表達(dá)量。
特點(diǎn)優(yōu)勢(shì):
1. 特異性:單胞菌通用PCR檢測(cè)試劑盒直銷使用的引物均經(jīng)過(guò)詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過(guò)GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫(kù)的比對(duì),確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè),特異性均達(dá)到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè),當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí),可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè),無(wú)需繁瑣的增菌過(guò)程。
4. 實(shí)用性:檢測(cè)范圍廣,涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌,可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè),整個(gè)檢測(cè)過(guò)程為3-4個(gè)小時(shí)。
5. 優(yōu)勢(shì)1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢(shì)2:該系列試劑盒均經(jīng)過(guò)大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過(guò)了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證,確保在使用過(guò)程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽(yáng)性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
3-Ethoxy-4-ethoxycarbonyl phenylacetic 中文名: 分子式:C13H16O5 度:98.0% 豚鼠肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子elisa試劑盒 豚鼠肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子試劑盒 規(guī)格型號(hào):96T/48T 豚鼠肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子試劑盒,規(guī)格型號(hào):96T/48T,來(lái)源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:豚鼠肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子試劑盒、豚鼠肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子eisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個(gè)月。
Repaglinide 中文名:瑞格列奈 分子式:Repaglinide 度:98.0% 兔子脫氫表雄酯elisa試劑盒 兔子脫氫表雄酯試劑盒 規(guī)格型號(hào):96T/48T 兔子脫氫表雄酯試劑盒,規(guī)格型號(hào):96T/48T,來(lái)源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:兔子脫氫表雄酯試劑盒、兔子脫氫表雄酯eisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個(gè)月。
3-Amino-2,6ione 中文名: 分子式:C5H9ClN2O2 度:98.0% 細(xì)胞毒 T 細(xì)胞相關(guān)抗原 4(CTLA-4) 作用: ELISA 規(guī)格: 48T/96T 進(jìn)口分裝
Methyl 2-bromomethyl-3-nitrobenzoate 中文名: 分子式:Methyl 2-bromomethyl-3-nitrobenzoate 度:98.0% 結(jié)締組織生長(zhǎng)因子 (CTGF) 作用: ELISA 規(guī)格: 48T/96T 進(jìn)口分裝
Ezetimibe 中文名:依澤替米貝 分子式:C24H21F2NO3 度:98.0% 心肌營(yíng)養(yǎng)素 -1(CT-1) 作用: ELISA 規(guī)格: 48T/96T 進(jìn)口分裝
人維生素D(VD)ELISAKit ELISA. 96T/48T 中文名: 分子式:C29H39N5O8
人脫氧酚/脫氧啉(DPD)ELISAKit ELISA. 96T/48T 2-Benzothiazolol 中文名:2-羥基苯并噻唑 分子式:C7H5NOS
人突觸足蛋白(SYNPO)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒 Human SYNPO (Synaptopodin) ELISA Kit 2-Deoxy-2,2-difluoro-D-erythro-pentafuranous-1-ulose-3,5-dibenzoate 中文名: 分子式:C19H14F2O6
人鐵蛋白(FE)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒 Human FE (Ferritin) ELISA Kit 3,6'-Disinapoylsucrose 中文名:3,6'- 二芥子?;崽?/span> 分子式:C34H42O19
人特異性抗原(TSA)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 2-Cyclopropyl-4-(4-fluorophenyl)-quinolyl-3-methanol 中文名: 分子式:C19H16FNO
單胞菌通用PCR檢測(cè)試劑盒直銷SFRP1 Others Human 人 sFRP1 / SARP2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 3-羥基-4-甲氧基肉桂酸質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口3-Hydroxy-4-methoxycinnamic
CL-0047C6(大鼠細(xì)胞)5×106cells/瓶×2吡嗪酰胺-d3質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口Pyrazinamide-d3
CSAG1 Others Human 人 CSAGE / CSAG1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 地美環(huán)素質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口Demeclocycline
小鼠腸微細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL鹽酸地美環(huán)素半水化合物質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
293LVT人胚腎細(xì)胞--用于慢病毒包裝 293LVT human embryonic kidney cells -- for leiviral packaging DMEM(GIBCO:11995)+10% FBS(GIBCO)+1%NEAA+200mM L-glutamine乙基2-(6-氨基-2,3-)甘氨酸(阿那格雷雜質(zhì)A)質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口Ethyl 2-(6-Amino-2,3-dichlorobenzyl)glycine(Anagrelide Impurity A)
人臍內(nèi)皮細(xì)胞;HUV-EC-C鄰硝基本-α-D-葡萄糖苷shēng huà shì jì容量:100克
CMA1 Others Human 人 CMA1 / Chymase 1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 2,4,6-三基本安 2,4,6-Trimqthylcnilinq 1988-2-1
草魚腎細(xì)胞;GIK鋅shēng huà shì jì容量:RT5克
T24細(xì)胞,膀胱移行細(xì)胞癌細(xì)胞 子宮高分化鱗癌細(xì)胞,HCC細(xì)胞 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細(xì)胞;KMY0908堿式碳酸鋅shēng huà shì jì容量:50毫升
615小鼠滑膜瘤株;ZM75566-99-92-2-Naphthaldehyde
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。