|
| 產(chǎn)地 | 進(jìn)口、國產(chǎn) |
| 品牌 | 帛科 |
| 貨號 | BK-P64742 |
| 用途 | 公司產(chǎn)品僅用于科研 |
| 包裝規(guī)格 | 50次 |
| 純度 | % |
| CAS編號 | |
| 是否進(jìn)口 | 是 |
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
|
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
貨號 |
|
石斑魚虹彩病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 |
50次 |
BK-P64742 |
實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
PCR實(shí)驗(yàn)步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其完全溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其完全溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液
濃度和純度。
使用方法：
一、樣品采集：
1、食品樣品：樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗(yàn)要求進(jìn)行。
2、血液樣品：用無菌注射器抽取受檢者血2mL，注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。
3、糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品：取部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽性對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對照。
2. 標(biāo)記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
6. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
實(shí)時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，*通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括*定量和相對定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的*定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR
兔晶體上皮細(xì)胞永生系;N/N1003A(RLE)濕霉素乙，英文名或英文縮寫：Hygromycin B，級別：II型，牛鼻膜，規(guī)格：10u
MSR1 Others Human 人 MSR1 / SCARA1 / CD204 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 本加醋;本醋 Bqnzoic ccid;Drccylic ccid 62-82-0
CL-0119HuH-6(人肝母細(xì)胞瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2吉西他賓，英文名或英文縮寫：Gemcitabine，級別：USP級,1534u/mg，規(guī)格：25毫克
IgG3 Others Mouse 小鼠 IgG3-Fc 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) PEP嶙酸1醇酸單鹽5克AR，99%
小鼠肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL7758-29-4三1酸五鈉wo7ium tripolyphosphate
CL-0189Raji(Butt's瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2D-精氨酸D-Arginine質(zhì)量規(guī)格：0.98
Jurk. Clone E6-1細(xì)胞，細(xì)胞 急性T細(xì)胞細(xì)胞,TALL-104細(xì)胞 *導(dǎo)管癌細(xì)胞;CFPAC-1D-焦谷氨酸（標(biāo)準(zhǔn)品）D-Pyroglutamic acid質(zhì)量規(guī)格：HPLC法有關(guān)物質(zhì)檢查
AAV-293(胚腎細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2異鼠李素-3-O-槐二糖-7-O-鼠李糖苷（標(biāo)準(zhǔn)品）Isorhamnetin 3-sophoroside-7-rhamnoside質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
PVRL2 Others Human CD112 / Nectin-2 / PVRL2 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (-)-Holostyligone(-)-Holostyligone質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
平滑肌細(xì)胞生長添加物SMCGS5-羧基-X-羅丹明5-Carboxy-X- rhodamine; 5-ROX質(zhì)量規(guī)格：>97%
原代軟骨細(xì)胞特制無血清添加劑Many types of cells包裝：1ml?；蝗?span>-β-D-葡萄糖苷酸Furosemide Acyl-β-D-glucuronide質(zhì)量規(guī)格：
MSC, 小鼠雪旺細(xì)胞 小鼠逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝細(xì)胞，PT67細(xì)胞 P3/NSI/1-Ag4-1 [NS-1](*瘤細(xì)胞)ent-加蘭他敏ent-Galanthamine質(zhì)量規(guī)格：
巨細(xì)胞細(xì)胞株;Mo7e差向-加蘭他敏N氧化物Epi-galanthamine N-Oxide質(zhì)量規(guī)格：
CD200R1 Others Cynomolgus 食蟹猴 CD200R / OX2-R 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 加蘭他敏N氧化物Galanthamine N-Oxide質(zhì)量規(guī)格：
小鼠海馬趾神經(jīng)元MN-h加蘭他敏β-D-葡萄糖苷酸Galanthamine β-D-Glucuronide質(zhì)量規(guī)格：
TNFRSF17 Others Rat 大鼠 TNFRSF17 / BCMA 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 二甲基亞砜(ACS,光譜級)Dimethyl
sulfoxide質(zhì)量規(guī)格：ACS,光譜級
大鼠腸上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL乙二醇(光譜 ,≥99%)Ethylene glycol質(zhì)量規(guī)格：光譜 ,≥99%
V79倉鼠肺細(xì)胞 V79 hamster lung cells RPMI-1640(GIBCO)+20%FBS甘油(for spectroscopy,≥99.5%)Glycerol in water for HPLC verification質(zhì)量規(guī)格：for spectroscopy,≥99.5%
FGF18 Protein Mouse 重組小鼠 FGF18 / FGF-18 蛋白 (His 標(biāo)簽)碳酸鋰(SP)Lithium carbonate質(zhì)量規(guī)格：SP
Calu-6(人肺退行性癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 人微內(nèi)皮細(xì)胞HPrMEC新亞銅試劑鹽酸鹽一水合石斑魚虹彩病毒染料法熒光定量PCR試劑盒物(99%)Neocuproine monohydrate質(zhì)量規(guī)格：0.99
本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
