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免疫熒光技術(shù)的實(shí)驗(yàn)步驟：
一、準(zhǔn)備好試劑與儀器：
磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標(biāo)記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。
二、實(shí)驗(yàn)步驟
1.滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待檢標(biāo)本片上，十分鐘后棄去，使標(biāo)本保持一定濕度。
2.滴加適當(dāng)稀釋的熒光標(biāo)記的抗體溶液，使其完全覆蓋標(biāo)本，置于有蓋搪瓷盒內(nèi)，保溫一定時(shí)間以三十分鐘為參考。
3.取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS沖洗后，再按順序過0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸三到五分鐘，并不停地?fù)u晃振蕩。
4.取出玻片，用濾紙吸去多余水分，但不使標(biāo)本干燥，加一滴緩沖甘油，以蓋玻片覆蓋。
5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標(biāo)本的特異性熒光強(qiáng)度。

英文名稱   Anti-PPAP2A
中文名稱  磷酸脂磷酸水解酶1抗體
濃    度  1mg/1ml 
規(guī) 格  0.1ml/100μg 0.2ml/200μg
抗體來源  Rabbit
克隆類型  polyclonal 
交叉反應(yīng)   Human, Mouse, Rat, Dog, Cow, Horse, Rabbit, Sheep 
產(chǎn)品類型     一抗
別    名  Lipid phosphate phosphohydrolase 1; Lipid phosphate phosphohydrolase 1a; LLP1a; LPP1; LPP1_HUMAN; PAP 2a; PAP-2a; PAP2; PAP2-alpha; PAP2a; PAP2a2; PAP2alpha2; PAPalpha1; Phosphatidate phosphohydrolase type 2a; Phosphatidic acid phosphatase 2a; Phosphatidic acid phosphatase type 2A; Phosphatidic acid phosphohydrolase type 2a; PPAP2A; Type 2 phosphatidic acid phosphatase alpha; Type 2 phosphatidic acid phosphohydrolase.
研究領(lǐng)域    細(xì)胞生物 免疫學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 脂蛋白
蛋白分子量   predicted molecular weight: 32kDa
性    狀  Lyophilized or Liquid 
免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human PPAP2A
亞    型  IgG 
純化方法  affinity purified by Protein A 
儲(chǔ) 存 液   0.01M PBS, pH 7.4 with 10 mg/ml BSA and 0.1%
產(chǎn)品應(yīng)用    WB=1:100-500 ELISA=1:500-1000 IP=1:20-100 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 Flow-Cyt=1:100-500 IF=1:100-500

抗體制備過程：

1.材料與試劑
  a．提取的動(dòng)物 Ig
  b．弗氏完全佐劑和弗氏不完全佐劑
  c．青霉素和鏈霉素
  d．實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 兔
  e．其它材料及試劑
2、選擇實(shí)驗(yàn)活體。
3、進(jìn)行動(dòng)物免疫實(shí)驗(yàn)。
4、試取血樣進(jìn)行測(cè)試，查看免疫效果。
5、如果免疫成功，殺死實(shí)驗(yàn)活體，采集全部血清。
6、純化出抗體。
7、鑒定抗體。胎牛血清（無菌采制）

抗原準(zhǔn)備：
經(jīng)常使用的抗原有：偶聯(lián)多肽、偶聯(lián)的小分子或化合物、天然或重組蛋白等等。
對(duì)可溶性抗原而言，為了增強(qiáng)其免疫原性或改變免疫反應(yīng)的類型、節(jié)約抗原等目的，通常采用加佐劑的方法以刺激機(jī)體產(chǎn)生較強(qiáng)的免疫應(yīng)答。
多克隆抗體和單克隆抗體的區(qū)別：
由一種克隆產(chǎn)生的特異性抗體叫做單克隆抗體。而同一種抗原決定簇，在機(jī)體內(nèi)也可以由好幾種克隆來產(chǎn)生抗體，形成好幾種單克隆抗體混雜物，稱為多克隆抗體。多克隆抗體是由異源抗原（大分子抗原、半抗原偶聯(lián)物）刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫反應(yīng)，有機(jī)體漿細(xì)胞分泌的一組免疫球蛋白。
效價(jià)測(cè)定：采用瓊脂擴(kuò)散法。
⑴ 將血清倍比稀釋，加入外周孔。
⑵ 中間孔加動(dòng)物 Ig。
⑶ 37℃濕盒瓊擴(kuò)24 小時(shí)后觀察結(jié)果。 

實(shí)驗(yàn)原理：
（1）特異性結(jié)合抗原：抗體本身不能直接溶解或殺傷帶有特異抗原的靶細(xì)胞，通常需要補(bǔ)體或吞噬細(xì)胞等共同發(fā)揮效應(yīng)以清除病原微生物或?qū)е?。然而，抗體可通過與病毒或毒素的特異性結(jié)合，直接發(fā)揮中和病毒的作用。 
（2）活補(bǔ)體：IgM、IgG1、IgG2和IgG3可通過經(jīng)典途徑激活補(bǔ)體，凝聚的IgA、IgG4和IgE可通過替代途徑激活補(bǔ)體。 
（3）結(jié)合細(xì)胞：不同類別的免疫球蛋白，可結(jié)合不同種的細(xì)胞，參與免疫應(yīng)答。 
（4）可通過胎盤及粘膜：免疫球蛋白G（IgG）能通過胎盤進(jìn)入胎兒血流中，使胎兒形成自然被動(dòng)
免疫。免疫球蛋白A（IgA）可通過及粘膜，是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。 
（5）具有抗原性：抗體分子是一種蛋白質(zhì)，也具有刺機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的性能。不同的免疫球蛋白分子，各具有不同的抗原性。 
（6）抗體對(duì)理化因子的與一般球蛋白相同：不耐熱，60～70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質(zhì)凝固變性的物質(zhì)，均能破壞抗體的作用?？贵w可被中性鹽類沉淀。在 上?？捎昧蛩徜@或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白，再經(jīng)透析法將其純化。
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