產(chǎn)地 | 進口、國產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號 | BK-P64701 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用于科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號 | |
是否進口 | 是 |
本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
貨號 |
病毒通用型染料法熒光定量PCR試劑盒 |
50次 |
BK-P64701 |
實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
PCR實驗步驟:
①取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其完全溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝?,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其完全溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液
濃度和純度。
使用方法:
一、樣品采集:
1、食品樣品:樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗要求進行。
2、血液樣品:用無菌注射器抽取受檢者血2mL,注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管,立即混勻。
3、糞便樣品:取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品:取部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽性對照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對照。
2. 標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
6. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
CL-0032BEL-7404(人細胞)5×106cells/瓶×23-metxoxypxenol3-羥基1克CP,99%
ACVR2B Others Cynomolgus 食蟹猴 ACVR2B / ACIIB 人細胞裂解液 (陽性對照) 三錄本 Bqnzotrichloridq1998-7-7
無血清細胞凍存液SF-CFMESBO環(huán)氧豆油100克AR,90%
SNU-182細胞,人細胞 穩(wěn)定表達EBNA1的人胚腎細胞,293E細胞 外周血白細胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)二水合鉬酸鈉,英文名或英文縮寫:wo7ium molybdate dihydrate,級別:AR,99.5%,規(guī)格:100克
綿羊肺細胞;OAR-L1Middlebrook7H10Agar 500g原裝 BD 262710
犬腎細胞系/野生型;MDCK/wildL-半胱胺酸鹽酸鹽無水物L-Cysteine ,anhydrous質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
SEMA5A Others Mouse 小鼠 Semaphorin 5A / SEMA5A 細胞裂解液 (陽性對照) L-賴氨酸甲酯鹽酸鹽L-Lysine methyl ester di質(zhì)量規(guī)格:0.98
成纖維細胞完全培養(yǎng)基 100mLL-蛋氨酸甲酯鹽酸鹽L-Mine Methyl Ester 質(zhì)量規(guī)格:>98%
C918細胞,眼脈絡(luò)色素瘤細胞 糞腸球菌(高耐) 正常小鼠Sertoli細胞;TM4膽硫酸酯鈉鹽 cholesteryl sulfate質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
CCL16 Protein Human 重組 CCL16 / HCC-4 / NCC4 蛋白 (His 標簽)O-叔丁基-L-絲氨酸甲酯鹽酸鹽O-tert-Butyl-L-serine
methyl ester 質(zhì)量規(guī)格:0.98
小鼠胚胎成纖維細胞;NIH/3T3三亞苯(>96.0%(GC))Triphenylene質(zhì)量規(guī)格:>96.0%(GC)
CXCL16 Others Canine 狗 CXCL16 / SR-PSOX 細胞裂解液 (陽性對照) 內(nèi)消旋-四苯基卟吩(>92.0%(HPLC))meso-Tetraphenylchlorin質(zhì)量規(guī)格:>92.0%(HPLC)
Caco-2,結(jié)直腸腺癌細胞四苯基卟吩(不含氯)(>98.0%(HPLC))Tetraphenylporphyrin (Chlorin free)質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC)
NEI-H209細胞,小細胞細胞 細胞,22RV1細胞 脈絡(luò)叢成纖維細胞RNAHCPF miRNA5 μg2,4,6-三苯基-1,3,5-三嗪(>98.0%(GC))2,4,6-Triphenyl-1,3,5-triazine質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)
非洲綠猴腎細胞系/HCV-NS5B;Vero-HCV-NS5B1,3-二苯基-1,3-丙二酮(>98.0%(GC))1,3-Diphenyl-1,3-propanedione質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)
MKN-45細胞,人低分化細胞 人神經(jīng)母細胞瘤細胞,BE(2)C細胞 非洲綠猴腎細胞系/HCV-NS2;Vero-HCV-NS2氘代DMSO-D6(10 g )Dimethyl Sulfoxide-D6質(zhì)量規(guī)格:D,99.9%
CRFK(貓腎細胞) 5×106cells/瓶×2氘代DMSO-D6(50 g )Dimethyl Sulfoxide-D6質(zhì)量規(guī)格:D,99.8%+TMS 0.03%
CA10 Others Human 人 CA10 / CARPX 人細胞裂解液 (陽性對照) 氘代DMSO-D6(50 g )Dimethyl Sulfoxide-D6質(zhì)量規(guī)格:D,99.9%
人類成纖維細胞系;CNLMG-B5538SKIN氘代DMSO-D6(100g )Dimethyl Sulfoxide-D6質(zhì)量規(guī)格:D,99.8%
NRN1 Others Human 人 NRN1 / Neuritin 1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 乙酸銨(色譜級)Ammonium acetate質(zhì)量規(guī)格:for HPLC,≥99.0%
實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR(quantitative
real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,*通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進行定量(包括*定量和相對定量)和定性分析。
病毒通用型染料法熒光定量PCR試劑盒主要服務(wù):DNA或RNA的*定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR