規(guī)格參數：
產品名稱：DH5α 感受態(tài)細胞
規(guī)格 ：100ul*20、100ul*100
分類：克隆感受態(tài)細胞
用途：生化試劑（用于科研試驗研究）
儲存條件: -70℃保存，必須加干冰運輸。自收貨之日起液氮保存至少一年，-70℃保存至少6個月。
外觀:（性狀） 干冰運輸，單加10kg干冰費
單位: 袋
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。*天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
注意事項：
1. 感受態(tài)細胞*在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。
2. 混入質粒或連接產物時應輕柔操作。
3. 轉化高濃度的質粒或高效率的連接產物可相應減少最終用于涂板的菌量。
同一批感受態(tài)細胞，用含目的片段的T載體質粒轉化（陽性對照）能長出密密麻麻的菌落，而用另一種載體和目的片段的連接產物轉化，卻一個菌都沒長出來，重復了三次都這樣。請問這是感受態(tài)細胞的制作不過關，還是連接出了問題？哪個可能性大些？
答：應該是連接的問題。所有連接反應建議同時轉化酶切后的質粒作為另一個陰性對照，確定酶切是否完全。同時連接前請確定質粒和片段濃度達到最小連接量的要求。
感受態(tài)細胞放到-80冰箱了有半年了，還能用來轉化質粒嗎？
答：如-80冰箱儲存過程中沒有發(fā)生凍融的情況，是可以用來轉化的，但是由于凍存時間過長，轉化效率會有所下降，如果用于普通的質粒重轉或TA克隆等高效連接體系也是可以的，如珍貴的樣品請選用較為新鮮的感受態(tài)細胞。
操作方法：
1. DH5α感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質?；蜻B接產物）并用手撥打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時。
甲胎蛋白單克隆抗體（包被） AFP(A2) 0.1ml
甲胎蛋白單克隆抗體(檢測) AFP(A4) 0.1ml
ADP核糖基化因子結合蛋白1抗體 ARFIP1 0.1ml
芳香烴受體抗體 AHR 0.1ml
吸引素抗體 ATRN 0.2ml
腺苷三磷酸結合盒轉運體A1抗體 ABCA1 0.1ml
蛋白激酶B2 AKT2 0.1ml
生成素2抗體 Angiopoietin 2 0.1ml
芳香化酶/細胞色素P450/雌激素合成酶抗體 Aromatase 0.1ml
腺苷A2A受體抗體 Adenosine Receptor A2a 0.1ml
蛋白激酶A錨定蛋白95抗體 AKAP95 0.1ml
頂膜鈉依賴性膽鹽轉運體蛋白抗體 ASBT 0.1ml
去整合素樣金屬蛋白酶8抗體 ADAM8 0.2ml
芳香乙酰胺脫乙?；笜拥鞍?抗體 AADACL3 0.2ml
ACN9蛋白抗體 ACN9 0.2ml
雙鏈RNA腺苷酸脫氨基酶抗體（N端） ADAR1 (N-terminus) 0.2ml
腺苷單磷酸活化蛋白激酶α2抗體 AMPK alpha 2 0.1ml
腺苷酸激酶抗體 ADK 0.1ml
α2巨球蛋白樣蛋白1抗體 α2ML1 A2ML1 0.1ml
細胞凋亡相關蛋白3抗體 3-Apr 0.1ml
肌動蛋白α/α-SMA/α Actin抗體 Actin 0.1ml
ATP結合蛋白家族7抗體 ABCB7 0.2ml
ASCL2蛋白抗體 ASCL2 0.2ml
磷酸化脊髓蛋白1抗體 phospho-Ataxin 1(Ser775) 0.1ml
磷酸化活化轉錄因子1抗體 phospho-ATF1 (Ser63) 0.1ml
磷酸化活化復制因子2抗體 phospho-ATF2 (Ser480) 0.1ml
磷酸化活化復制因子2抗體 phospho-ATF2 (Thr51 + Thr53) 0.1ml
磷酸化活化復制因子2抗體 phospho-ATF2 (Thr69 + Thr51) 0.1ml
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