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上海帛科生物技術(shù)有限公司
   
     
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F-TOP10 感受態(tài)細(xì)胞
起訂量 (瓶)價(jià)格
1-102350 /瓶
≥101250 /瓶
  • 品牌:帛科
  • 產(chǎn)地:進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)
  • 貨號(hào):BK-G63251
  • 發(fā)布日期: 2021-02-21
  • 更新日期: 2024-12-23
產(chǎn)品詳請(qǐng)
產(chǎn)地 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)
保存條件 低溫冷藏
品牌 帛科
貨號(hào) BK-G63251
用途 產(chǎn)品僅用于科研
組織來(lái)源 詳見說明書
細(xì)胞形態(tài) 詳見說明書
是否是腫瘤細(xì)胞
CAS編號(hào)
保質(zhì)期 詳見說明書
器官來(lái)源 詳見說明書
免疫類型 詳見說明書
品系 詳見說明書
生長(zhǎng)狀態(tài) 詳見說明書
物種來(lái)源 詳見說明書
包裝規(guī)格 100ul*20 100ul*100
純度 %
是否進(jìn)口

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。*天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

規(guī)格參數(shù):

產(chǎn)品名稱:F-TOP10 感受態(tài)細(xì)胞
規(guī)格 :100ul*20 100ul*100
分類:克隆感受態(tài)細(xì)胞
用途:生化試劑(用于科研試驗(yàn)研究)
儲(chǔ)存條件: -70℃保存,必須加干冰運(yùn)輸。自收貨之日起液氮保存至少一年,-70℃保存至少6個(gè)月。
外觀:(性狀) 干冰運(yùn)輸,單加10kg干冰費(fèi)
單位: 袋

注意事項(xiàng):


1. 感受態(tài)細(xì)胞*在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA,不可在冰中放置時(shí)間過長(zhǎng),長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 混入質(zhì)?;蜻B接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?;蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。
同一批感受態(tài)細(xì)胞,用含目的片段的T載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)化(陽(yáng)性對(duì)照)能長(zhǎng)出密密麻麻的菌落,而用另一種載體和目的片段的連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化,卻一個(gè)菌都沒長(zhǎng)出來(lái),重復(fù)了三次都這樣。請(qǐng)問這是感受態(tài)細(xì)胞的制作不過關(guān),還是連接出了問題?哪個(gè)可能性大些?
答:應(yīng)該是連接的問題。所有連接反應(yīng)建議同時(shí)轉(zhuǎn)化酶切后的質(zhì)粒作為另一個(gè)陰性對(duì)照,確定酶切是否完全。同時(shí)連接前請(qǐng)確定質(zhì)粒和片段濃度達(dá)到最小連接量的要求。
感受態(tài)細(xì)胞放到-80冰箱了有半年了,還能用來(lái)轉(zhuǎn)化質(zhì)粒嗎?
答:如-80冰箱儲(chǔ)存過程中沒有發(fā)生凍融的情況,是可以用來(lái)轉(zhuǎn)化的,但是由于凍存時(shí)間過長(zhǎng),轉(zhuǎn)化效率會(huì)有所下降,如果用于普通的質(zhì)粒重轉(zhuǎn)或TA克隆等高效連接體系也是可以的,如珍貴的樣品請(qǐng)選用較為新鮮的感受態(tài)細(xì)胞。

周效磺胺(磺胺多辛)sulphadoxine質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR  化微粒體1脂酶D1(PhospholipaseD1)活性熒光定量檢測(cè)試劑盒20  Humansolubleierleukin-2receptor,IL-2sRαELISAkit 人白介素2可溶性受體α(IL-2sRα/CD25)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

周效磺胺(標(biāo)準(zhǔn)品)sulphadoxine質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品  RatImmunoglobulinM,IgMELISA試劑盒大鼠球蛋白M(IgM)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T  Humanneuophilicalkalinephosphatase,NAPELISA試劑盒人中性粒細(xì)胞堿性1酸酶(NAP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

鹽酸羅匹尼羅Ropinirole HCl質(zhì)量規(guī)格:>98.0%  小鼠粘蛋白4(MUC4)ELISA試劑盒 ,英文名: MUC4 ELISA Kit  ELISAKitTNF-α豬壞死因子α規(guī)格:48T/96T

鹽酸羅哌卡因Ropivacaine  質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR,一水合物  層連蛋白/板層素(LN)ELISA檢測(cè)試劑盒MonkeyLaminin,LNELISAKit 96T/48T  Humanfetalsulfoslycoproteinaigen,FSAELISAKit人胚胎性硫糖蛋白抗原(FSA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

英文名稱Mouse17-KSELISAKIT小鼠17-同皮質(zhì)類(17-KS)規(guī)格:96T/48T  760961-03-3常春藤苷D品牌  Hederacoside D

產(chǎn)氣莢膜梭菌腸(Closidiumperfringenscpe)鑒定16SrDNAPCR擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒20  36284-77-2常春藤皂苷B規(guī)格  Hederasaponin B

RatFreeTestoterone,F-TESTOELISA試劑盒大鼠游離睪同(F-TESTO)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T  465-99-6常春藤皂苷元  Hederagenin

小鼠組蛋白H2b(histon-H2b)ELISA試劑盒 ,英文名: histon-H2b ELISA Kit  140147-77-9朝藿定A1說明書  Epimedin A1

小鼠凝血因子Ⅸ(FⅨ)ELISA檢測(cè)試劑盒MouseFcoagulationfactorⅨ,FⅨELISAKit 96T/48T  110623-72-8朝藿定A品牌  Epimedin A

80321-69-3七葉膽苷XVII規(guī)格  Gypenoside XVII  組織AX1激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20

80286-58-4青蒿酸規(guī)格  Artemisic acid  組織AURORA-C激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20

80154-34-3豆腐果苷  Helicid   組織AURORA-B激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20

7-乙氧基莫諾苷規(guī)格  7-O-ethyl-morroniside   組織AURORA-A激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20

79916-77-1連翹脂苷A說明書  Forsythoside A  組織ATP生物發(fā)光法定量檢測(cè)試劑盒50

F-TOP10 感受態(tài)細(xì)胞操作方法:

1. DH5α感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA(質(zhì)?;蜻B接產(chǎn)物)并用手撥打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰中并靜置2分鐘,晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基 (2YT或LB),混勻后37℃,200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作,將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時(shí)。

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