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上海帛科生物技術(shù)有限公司
   
     
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NovaBlue(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞
起訂量 (瓶)價(jià)格
1-10￥2350 /瓶
≥10￥1250 /瓶
  • 品牌：帛科
  • 產(chǎn)地：進(jìn)口、國產(chǎn)
  • 貨號(hào)：BK-G63290
  • 發(fā)布日期： 2021-02-21
  • 更新日期： 2024-12-23
產(chǎn)品詳請(qǐng)
產(chǎn)地 進(jìn)口、國產(chǎn)
保存條件 低溫冷藏
品牌 帛科
貨號(hào) BK-G63290
用途 產(chǎn)品僅用于科研
組織來源 詳見說明書
細(xì)胞形態(tài) 詳見說明書
是否是腫瘤細(xì)胞 否
CAS編號(hào)
保質(zhì)期 詳見說明書
器官來源 詳見說明書
免疫類型 詳見說明書
品系 詳見說明書
生長(zhǎng)狀態(tài) 詳見說明書
物種來源 詳見說明書
包裝規(guī)格 100ul*10 100ul*50
純度 %
是否進(jìn)口 是
規(guī)格參數(shù)：

產(chǎn)品名稱：NovaBlue(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞
規(guī)格 ：100ul*10 100ul*50
分類：表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞
用途：生化試劑（用于科研試驗(yàn)研究）
儲(chǔ)存條件: -70℃保存，必須加干冰運(yùn)輸。自收貨之日起液氮保存至少一年，-70℃保存至少6個(gè)月。
外觀:（性狀） 干冰運(yùn)輸，單加10kg干冰費(fèi)
單位: 袋

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。*天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
注意事項(xiàng)：
1. 感受態(tài)細(xì)胞*在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過長(zhǎng)，長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 混入質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。
同一批感受態(tài)細(xì)胞，用含目的片段的T載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)化（陽性對(duì)照）能長(zhǎng)出密密麻麻的菌落，而用另一種載體和目的片段的連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化，卻一個(gè)菌都沒長(zhǎng)出來，重復(fù)了三次都這樣。請(qǐng)問這是感受態(tài)細(xì)胞的制作不過關(guān)，還是連接出了問題？哪個(gè)可能性大些？
答：應(yīng)該是連接的問題。所有連接反應(yīng)建議同時(shí)轉(zhuǎn)化酶切后的質(zhì)粒作為另一個(gè)陰性對(duì)照，確定酶切是否完全。同時(shí)連接前請(qǐng)確定質(zhì)粒和片段濃度達(dá)到最小連接量的要求。
感受態(tài)細(xì)胞放到-80冰箱了有半年了，還能用來轉(zhuǎn)化質(zhì)粒嗎？
答：如-80冰箱儲(chǔ)存過程中沒有發(fā)生凍融的情況，是可以用來轉(zhuǎn)化的，但是由于凍存時(shí)間過長(zhǎng)，轉(zhuǎn)化效率會(huì)有所下降，如果用于普通的質(zhì)粒重轉(zhuǎn)或TA克隆等高效連接體系也是可以的，如珍貴的樣品請(qǐng)選用較為新鮮的感受態(tài)細(xì)胞。
操作方法：
1. DH5α感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物）并用手撥打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時(shí)。

章胺鹽酸鹽；正辛弗林DL-Octopamine HCl質(zhì)量規(guī)格：>98%  小鼠(INS)ELISA試劑盒 ，英文名： INS ELISA Kit  ELISAKitPⅠCP豬Ⅰ型前膠原羧基端肽規(guī)格：48T/96T

舒林酸Sulindac質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR  小鼠色素上皮衍生因子(PEDF)ELISA檢測(cè)試劑盒Mousepigmeepithelium-derivedfactor,PEDFELISAKit 96T/48T  Humancysteinylleukoienes，CysLTsELISAKit人半胱氨酰白三烯(CysLTs)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

舒林酸(標(biāo)準(zhǔn)品)Sulindac質(zhì)量規(guī)格：>98%,標(biāo)準(zhǔn)品  人甲狀腺刺激球蛋白(TSI)試劑盒 human thyroid stimulating immunoglobulin,TSI ELISA Kit  人食欲素/阿立新B(OX-B)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

托品酸(標(biāo)準(zhǔn)品)Tropic acid質(zhì)量規(guī)格：>98%  Ratbetacellulin,BTCELISAKit大鼠β細(xì)胞素(BTC)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  小鼠脂聯(lián)素(ADP)試劑盒 Mouse adiponectin,ADP ELISA Kit

小鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(TGFβ1)ELISA試劑盒 ，英文名： TGFβ1 ELISA Kit  572-31-6黃杞苷說明書  Engeletin

小鼠糖原1酸化酶同工酶MM(GP-MM)ELISA檢測(cè)試劑盒MouseGlycogenphosphorylaseMM,GP-MMELISAKit 96T/48T  21967-41-9黃芩苷品牌  Baicalin

人抗SS-B/La抗體試劑盒 Human SS-B/La Aibody,ELISA Kit  491-67-8黃芩素規(guī)格  Baicalein

Rabbitα2-Aiplasmin,α2-APELISAKit兔子α2抗纖溶酶(α2-AP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  860-79-7黃楊堿  Cyclovirobuxin D

載玻片細(xì)胞IL蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20  140360-29-8灰氈毛忍冬皂苷甲說明書  Macranthoidin A

568-72-9丹參酮IIA  Tanshinone IIA   豬血纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)試劑盒 Porcine Fibrinogen Degradation Product,FDP ELISA Kit

56725-99-6淫羊藿苷I規(guī)格  Icarisid I  豬血纖蛋白原(Fbg)ELISA檢測(cè)試劑盒PorcineFibrinogen,FbgELISAKit 96T/48T

5610-40-2一葉萩堿規(guī)格  Securinine   豬調(diào)節(jié)蛋白(TM)試劑盒 Porcine thrombomodulin,TM ELISA Kit

NovaBlue(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞55916-51-3重樓皂苷VI規(guī)格  Polyphyllin VI  豬素A2(TXA2)試劑盒 Pig Thromboxane A2,TXA2 ELISA Kit

5578-73-4血根堿規(guī)格  Sanguinarine  豬血清淀粉樣蛋白A(SAA)試劑盒 Pig serum amyloid A,SAA ELISA Kit

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