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上海帛科生物技術(shù)有限公司
   
     
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GV3101(pJlC SA-rep)電擊感受態(tài)細(xì)胞
起訂量 (瓶)價(jià)格
1-102350 /瓶
≥101250 /瓶
  • 品牌:帛科
  • 產(chǎn)地:進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)
  • 貨號(hào):BK-G63301
  • 發(fā)布日期: 2021-02-21
  • 更新日期: 2024-12-23
產(chǎn)品詳請(qǐng)
產(chǎn)地 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)
保存條件 低溫冷藏
品牌 帛科
貨號(hào) BK-G63301
用途 產(chǎn)品僅用于科研
組織來(lái)源 詳見說明書
細(xì)胞形態(tài) 詳見說明書
是否是腫瘤細(xì)胞
CAS編號(hào)
保質(zhì)期 詳見說明書
器官來(lái)源 詳見說明書
免疫類型 詳見說明書
品系 詳見說明書
生長(zhǎng)狀態(tài) 詳見說明書
物種來(lái)源 詳見說明書
包裝規(guī)格 50ul*10 50ul*50
純度 %
是否進(jìn)口
規(guī)格參數(shù):

產(chǎn)品名稱:GV3101(pJlC SA-rep)電擊感受態(tài)細(xì)胞
規(guī)格 :50ul*10 50ul*50
分類:根癌農(nóng)桿菌感感受態(tài)細(xì)胞
用途:生化試劑(用于科研試驗(yàn)研究)
儲(chǔ)存條件: -70℃保存,必須加干冰運(yùn)輸。自收貨之日起液氮保存至少一年,-70℃保存至少6個(gè)月。
外觀:(性狀) 干冰運(yùn)輸,單加10kg干冰費(fèi)
單位: 袋

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。*天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
注意事項(xiàng):
1. 感受態(tài)細(xì)胞*在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA,不可在冰中放置時(shí)間過長(zhǎng),長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 混入質(zhì)?;蜻B接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。
同一批感受態(tài)細(xì)胞,用含目的片段的T載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)化(陽(yáng)性對(duì)照)能長(zhǎng)出密密麻麻的菌落,而用另一種載體和目的片段的連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化,卻一個(gè)菌都沒長(zhǎng)出來(lái),重復(fù)了三次都這樣。請(qǐng)問這是感受態(tài)細(xì)胞的制作不過關(guān),還是連接出了問題?哪個(gè)可能性大些?
答:應(yīng)該是連接的問題。所有連接反應(yīng)建議同時(shí)轉(zhuǎn)化酶切后的質(zhì)粒作為另一個(gè)陰性對(duì)照,確定酶切是否完全。同時(shí)連接前請(qǐng)確定質(zhì)粒和片段濃度達(dá)到最小連接量的要求。
感受態(tài)細(xì)胞放到-80冰箱了有半年了,還能用來(lái)轉(zhuǎn)化質(zhì)粒嗎?
答:如-80冰箱儲(chǔ)存過程中沒有發(fā)生凍融的情況,是可以用來(lái)轉(zhuǎn)化的,但是由于凍存時(shí)間過長(zhǎng),轉(zhuǎn)化效率會(huì)有所下降,如果用于普通的質(zhì)粒重轉(zhuǎn)或TA克隆等高效連接體系也是可以的,如珍貴的樣品請(qǐng)選用較為新鮮的感受態(tài)細(xì)胞。
操作方法:
1. DH5α感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA(質(zhì)粒或連接產(chǎn)物)并用手撥打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰中并靜置2分鐘,晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基 (2YT或LB),混勻后37℃,200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作,將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時(shí)。

孕二烯酮(標(biāo)準(zhǔn)品)Gestodene質(zhì)量規(guī)格:>99%,標(biāo)準(zhǔn)品  小鼠維生素B6(VB6)ELISA試劑盒 ,英文名: VB6 ELISA Kit  ELISAKitET小鼠內(nèi)規(guī)格:48T/96T

馬來(lái)酸阿扎他啶Azatadine Maleate質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR  小鼠凋亡相關(guān)因子(FAS/CD95)ELISA檢測(cè)試劑盒MouseFactor-relatedApoptosis,FASELISAKit 96T/48T  HumanAi-OvaryAibody,AOAbELISAKit人抗卵巢抗體(AOAb)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

鹽酸班布特羅(標(biāo)準(zhǔn)品)Bambuterol HCl質(zhì)量規(guī)格:≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品  人果糖二1酸縮酶A(ALDOA)試劑盒 Human ALDOA ELISA kit  人類白細(xì)胞抗原E(HLA-E)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

鹽酸班布特羅Bambuterol HCl質(zhì)量規(guī)格:≥98%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)  Ratendotoxin,ETELISAKit大鼠內(nèi)(ET)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T  小鼠葡萄糖激酶(GCK)試劑盒 Mouse Glucokinase,GCK ELISA kit

犬維生素A(VA)ELISA檢測(cè)試劑盒CanineVitaminA,VAELISAKit 96T/48T  487-41-2連翹苷  Phillyrin

犬透明質(zhì)酸酶1(HAase 1)試劑盒 Canine Hyaluronidase 1,HAase 1 ELISA Kit  79916-77-1連翹脂苷A說明書  Forsythoside A

英文名稱HumaumornecrosisfactorβELISAKITβ(TNFβ)規(guī)格:96T/48T  81525-13-5連翹脂苷B品牌  Forsythoside B

超氧化物歧化酶(SOD)細(xì)胞裂解樣品制備試劑盒50  2586-96-1蓮心堿規(guī)格  Liensinine

ratgrowthhormonereleasinghormone,GHRHELISA試劑盒大鼠促生長(zhǎng)激素釋放激素(GRH)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T  5088-90-4蓮心堿高氯酸鹽  Liensinine Perchlorate

530-57-4丁香酸  Syringic acid   豬瘦素(LEP)ELISA檢測(cè)試劑盒PorcineLeptin,LEPELISAKit 96T/48T

5302-45-4三七素品牌  dencichine  豬生長(zhǎng)抑素(SS)ELISA檢測(cè)試劑盒PorcineSomatostatin,SSELISAKit 96T/48T

529-59-9染料木苷規(guī)格  Genistin  豬生長(zhǎng)激素(GH)ELISA檢測(cè)試劑盒Porcinegrowthhormone,GHELISAKit 96T/48T

529-53-3野黃芩素品牌  Scutellarein  豬皮質(zhì)酮/腎上腺酮(CO)ELISA檢測(cè)試劑盒PorcineCoicosterone,COELISAKit 96T/48T

GV3101(pJlC SA-rep)電擊感受態(tài)細(xì)胞529-53-3野黃芩素規(guī)格  Scutellarein   豬可溶性細(xì)胞間粘附分子1(sICAM-1)ELISA檢測(cè)試劑盒PorcineSolubleIercellularAdhesionMolecule-1,sICAM-1ELISAKit 96T/48T

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